本試劑盒采用凝膠反相酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性及其無活性前體酶原譜系。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備含有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠，含蛋白酶的樣

品在此凝膠中進行電泳，電泳時SDS與樣本中的MMP可逆性結合，導致MMP氫鍵和疏水鍵破壞而不能發揮分解明膠的作用。電泳結束后取出凝膠與酶反應Buffer孵育，MMP恢復活性，凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色

而形成透亮區域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9特異蛋白底物及酶學反應緩沖液，可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進行25-50次標準小膠檢測（如果樣本MMP含量高，孵育時間短，不用換液可最多50次），如果小膠加樣孔為10~15個，則總計可最多檢測500~750個樣品。

檢測目的:

本試劑盒用于檢測組織、細胞中MMP-2、MMP-9 酶譜活性及其前體酶原酶譜。

MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒說明：

1. 10 mM EDTA能夠完-全抑制MMP活性。

2. 凝膠干燥：可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠，作為永-久記錄保留。

3. 本試劑盒僅供科研實驗使用，不得用于食用、臨床醫療等其它用途。

4.實驗操作中，請穿戴好實驗服、防護口罩和一次性實驗手套，避免直接接觸。嚴禁入口。

MMP-2-MMP-9 明膠酶譜法檢測試劑盒染色步驟：

1. 此染色液即為工作液，使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝

膠，并緩慢搖動2h；

2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠；

3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2h，傾去脫色液，再加入新脫色液進行脫色，直至出現透亮區域，此透亮

區域為 MMP 條帶的位置。（通常此過程需要 2～4h，也可脫色過夜至出現清晰透亮條帶和干凈的背景）；

4. 對凝膠進行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置對凝膠進行處理后保存。

說明：

A. 染色液含有甲醇，呈酸性，具有輕微腐蝕性，請穿戴好實驗服和一次性實驗手套，不要直接接觸。

嚴禁入口。使用完成后，請密封保存；

B. 脫色液配方：冰醋酸:甲醇:水＝7:5:88（V:V:V）；

C. 保存液：7％冰醋酸；

D. 凝膠染色之后，染色液可以回收利用，裝入新容器內，4oC保存，可反復使用2-3次。