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大鼠層粘蛋白(LN)elisa試劑盒對于樣品的要求有哪些!

發布時間: 2023-06-26  點擊次數: 385次

 大鼠層粘蛋白(LN)elisa試劑盒對于樣品的要求有哪些!

 

檢測范圍: 96T15μg/L -400μg/L,本試劑盒僅供研究使用。

使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中層粘連蛋白(LN)含量。

實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠層粘連蛋白(LN)水平。用純化的大鼠層粘連蛋白(LN)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入層粘連蛋白(LN),再與HRP 標記的層粘連蛋白(LN)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的層粘連蛋白(LN)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠層粘連蛋白(LN)濃度。

標本要求:
1.
標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

2.
不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


操作步驟:

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。400μg/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液200μg/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液100μg/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液50μg/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液25μg/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此重復5 次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3。

8. 洗滌:操作同5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10 分鐘.

10.  終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.  測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。操作程序總結:計算以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。


注意事項:
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD 值大于標準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 個月


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