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考馬斯亮藍快速染色液脫色方法

發布時間: 2021-04-26  點擊次數: 5697次

考馬斯亮藍快速染色液脫色方法

 

常規染色脫色方法:
 1、電泳結束后,將凝膠置于培養皿內,加入染色液,確保覆蓋凝膠。
 2、置于水平搖床或側擺搖床上緩慢搖動,室溫染色 1 小時或更長時間。
 3、倒出染色液(可重復使用 2-3 次)。加入脫色液,確保覆蓋凝膠。
 4、置于搖床上緩慢搖動,室溫脫色 4-24 小時。期間更換脫色液 2-4 次,至藍色背景全部脫去,蛋白條帶染色達到預期效果。一般脫色 1-2 小時后蛋白條帶即可出現。
 5、脫色后,凝膠保存在水中,用于拍照等。水中的凝膠會發生溶漲,如需避免溶漲,可以把膠保存在含 20%甘油的水中。保存可以制備干膠。
快速染色脫色方法: 
 1、電泳結束后,將凝膠置于適量考馬斯亮藍染色液中,微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。膠濃度大于 10%的凝膠比較堅韌,煮沸時不易破損;膠濃度小于 10%的凝膠,盡量避免煮沸。
 2、在染色液溫度較高的情況下,隨即在搖床上搖動 5-10 分鐘。
 3、倒出染色液(可重復使用 2-3 次)。加入適量脫色液,確保覆蓋凝膠。
 4、微波爐加熱至接近沸騰或剛剛沸騰,立即停止加熱。
 5、在脫色液溫度較高的情況下,隨即在搖床上搖動 5-10 分鐘。隨后通常能觀察到比較清楚的蛋白條帶。
 6、更換新鮮的脫色液,重復步驟 4 和步驟 5,直至藍色背景全部脫去,蛋白條帶達到預期染色效果。
 7、脫色后,凝膠保存在水中,用于拍照等。或置于含 20%甘油的水中。保存可以制備干膠。
注意事項:
 1、常規方法耗時較長,但檢測靈敏度更高,染色效果更加穩定。快速方法染色脫色速度快,通常檢測靈敏度略低,微波爐加熱時會出現溶液暴沸導致凝膠碎裂的情況,需特別小心。另外微波爐加熱加速染色液和脫色液中的乙酸揮發,好在通風櫥中進行。
 2、染色時間取決于凝膠厚度和染色時溫度。凝膠厚,溫度低,染色時間長;凝膠薄,溫度高,染色時間短。凝膠和染色液的顏色一致,在染色液中看不清凝膠時,即為充分染色。染色時間延長效果也更好。   
 3、脫色期間可以在脫色液中加入一片吸水紙,部分染料會吸附在吸水紙上,會加快脫色。脫色時間過長會導致蛋白條帶的顏色變淺。
 4、操作時請穿戴實驗服和一次性手套。
 

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