關(guān)于血清的細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)

1.血清必須貯存于–20～–70℃，若存放于4℃，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。如果一次無(wú)法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中，由于血清結(jié)凍時(shí)體積會(huì)增加約10%， 必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。

2. 一般廠商提供之血清為無(wú)菌，不需再無(wú)菌過(guò)濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾，勿直接過(guò)濾血清。

3.瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法)：–20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝，一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。

4. heat-inactivation 是指56℃,30分鐘加熱已*解凍之血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份(complement)去活化。除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。

補(bǔ)體參與之反應(yīng)有：cytolyticactivities,contraction of smooth muscle, release of histamine frommast cellsand platelets, enhanced phagocytosis, chemotaxis andactivation oflymphocytic and macrophage cell type。

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5.勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會(huì)因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)。

6. 血清之沉淀物

6.1.凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin)造成，這些凝絮沉淀物不會(huì)影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沉淀物，可用離心3000rpm,5min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾。不建議用過(guò)濾步驟去除這些凝絮沈淀物，因?yàn)闀?huì)阻塞過(guò)濾膜。

6.2.顯微鏡下觀察之“小黑點(diǎn)”：通常經(jīng)過(guò)熱處理之血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”，常會(huì)誤認(rèn)為血清遭受污染，而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物“，但在37℃環(huán)境下，又會(huì)使此沉淀物增多，更會(huì)誤認(rèn)為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細(xì) 菌之培養(yǎng)基檢測(cè)，又沒(méi)有污染。一般而言，此小黑點(diǎn)應(yīng)不會(huì)影響細(xì)胞之生長(zhǎng)，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號(hào)的血清。