植物類黃酮檢測(cè)試劑盒的技術(shù)參數(shù)

一、測(cè)定意義：

類黃酮是一類多苯化合物，屬于植物次生代謝物，對(duì)人

體具有消炎，抗菌，降血脂，清除體內(nèi)羥自由基，預(yù)防癌癥

等作用

二、測(cè)定原理：

在堿性亞硝酸鹽溶液中，類黃酮與鋁離子形成在502nm處

有特征吸收峰的紅色絡(luò)合物，測(cè)定樣品提取液在502nm處的吸

光值，即可計(jì)算樣品類黃酮含量。

三、儀器設(shè)備（自備）：

烘箱、粉碎儀、研缽、篩子、60%乙醇、離心機(jī)、可見分

光光度計(jì)、60℃震蕩恒溫箱。

四、試劑組成：（50T/48 樣）

提取液：60%乙醇，自備。

試劑一：液體2mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體2mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：標(biāo)準(zhǔn)品粉劑 1mg×1支，使用時(shí)加入1mL 60%乙醇，

于60℃恒溫振蕩10分鐘使其溶解，配成mg/mL

標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。

五、操作步驟：

1、類黃酮提取：

干樣：將樣本烘干至恒重，粉碎，過40目篩之后，稱取約0.02g，

加入2mL 提取液，60℃震蕩提取2小時(shí)，10000g，室溫

離心10min，取上清，待測(cè)。

鮮樣：將植物用生理鹽水清洗后，將表面水分擦干，剪碎，

液氮研磨成粉狀，稱取約0.05g，加入2mL提取液（含

量低可酌情減少提取液量），60℃震蕩提取2小時(shí)，

10000g，室溫離心10min，取上清，待測(cè)。

2、操作表：

注：正式實(shí)驗(yàn)前最好取1-2例相對(duì)差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)試，

ΔA測(cè)定大于1時(shí)需要稀釋樣本上清后再測(cè)定。

六、計(jì)算公式：

制作標(biāo)準(zhǔn)曲線：將1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用60%乙醇稀釋成

0.1mg/mL、0.08mg/mL、0.06mg/mL、0.04mg/mL、

0.02mg/mL幾個(gè)濃度按操作表標(biāo)準(zhǔn)管及空白管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，

得出OD值后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下：

則計(jì)算公式為：

類黃酮含量（mg/g）=（ΔA測(cè)定-0.0141）÷9.0771×提取液總體

積（2mL）÷樣本質(zhì)量（g）

七、技術(shù)參數(shù)：

1、試劑盒檢出限為1μg/mL，如果ΔA測(cè)定值大于1，則需將樣本

上清液作適當(dāng)稀釋以后測(cè)定；

2、本試劑盒回收率可達(dá)95%-100%，穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確性高；

3、標(biāo)準(zhǔn)品配置時(shí)溫度低會(huì)使其溶解緩慢，60℃振蕩溶解時(shí)需

密封好，防止液體溢出造成損失；

4、假如沒有分光光度計(jì)，也可用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，波長(zhǎng)不變

（或者在±10nm波動(dòng)范圍內(nèi)選擇）。

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